本標準適用于由發酵法生產,經提純制取,供食品生產作添加劑用的糖化酶制劑。1、技術要求1.1外觀:固體時,粉狀,無結塊。液體時,黃褐色,允許有少量凝集物。1.2項目和指標表1項目指標固體30000,40000,20000,30000液體50000,60000,40000,50000酶活力,u/g(mL)80000,100000,60000,80000150000,200000,水分,%不小于8.0細度(通過40目銅網篩)%不小于80酶活力保存率(室溫,半年),%不小于80重金屬(以Pb計),%不超過0.004鉛,%不超過0.001砷(以As計),%不超過0.0003黃曲霉毒素B1,%不超過0.0000005大腸菌群,個/100g(ml)不超過30沙門氏菌不得檢出2、試驗方法2.1外觀:用目視判定。2.2酶活力測定2.2.1試劑2.2.1.10.1N乙酸-乙酸鈉緩沖溶液(pH4.6):稱取6.7g乙酸鈉(CH3COONa·3H2O),吸取冰乙酸2.6mL,用蒸餾水溶解定容至1000mL,上述緩沖溶液應以酸度計校正pH值。2.2.1.20.05N硫代硫酸鈉溶液:按GB601《化學試劑標準溶液制備方法》中2.7執行。2.2.1.30.1N碘液:按GB601《化學試劑標準溶液制備方法》中2.10執行。2.2.1.40.1N氫氧化鈉溶液:按GB601《化學試劑標準溶液制備方法》中2.2執行。2.2.1.52N硫酸溶液:量取分析純濃硫酸(比重1.84)5.6mL緩緩加入適量蒸餾水中,冷卻后用蒸餾水定容至100mL,搖勻。2.2.1.620%氫氧化鈉溶液:稱取20g分析純氫氧化鈉,用蒸餾水溶解定容至100mL。2.2.1.72%可溶性淀粉溶液:稱取可溶性淀粉2.00g,然后用少量蒸餾水調勻,徐徐傾入已沸的蒸餾水中,煮沸至透明,冷卻,用蒸餾水定容至100mL,此溶液需當天配制。注:可溶性淀粉應符合HG3-3095質量標準要求。2.2.2測定程序2.2.2.1待測酶液的制備:稱取酶粉2.0000g(或1.00mL酶液),倒入50mL燒杯中,用少量的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液(pH4.6)溶解,并用玻璃棒搗碎,將上層清液小心傾入適當的容量瓶中,沉渣再加入少量上述緩沖溶液,如此反復搗研3～4次,全部移入容量瓶中,用緩沖溶液定容至刻度,搖勻,通過4層紗布過濾。再用濾紙濾清,濾液供測定用。濃縮酶液可直接吸取一定量于容量瓶中,用緩沖溶液稀釋定容至刻度。注:制備酶液時,酶液濃度較好的控制在消耗0.05N硫代硫酸鈉(空白-樣品)的差數為3～6ml左右(以每毫升酶活力約50～90單位為宜)。2.2.2.2測定:于甲、乙兩支50mL比色管中,分別加入2%可溶性淀粉溶液25mL,0.1M乙酸-乙酸鈉緩沖溶液(pH4.6)5mL,搖勻。于40±0.2℃的恒溫水浴中預熱5～10min。在甲管中加入酶制備液2.0mL(酶的總活力約110～170單位)立即記時,搖勻。在此溫度下準確反應1h后,立即在甲、乙兩管各加20%氫氧化鈉溶液0.2mL,搖勻,將兩管取出迅速用水冷卻,并于乙管中補加酶制備液2.0mL(作為對照)取兩管中上述反應液各5mL放入碘量瓶中,準確加入0.1N碘液10mL,再加0.1N氫氧化鈉溶液15mL(邊加邊搖晃),放置暗處15min,加入2N硫酸2mL,用0.05N硫代硫酸鈉溶液滴定至無色為終點。2.2.2.3計算1g酶粉或1mL酶液在40℃、pH4.6的條件下,1h分解可溶性淀粉產生1mg葡萄糖的酶量為一個酶活力單位。132.2X=(A-B)×N×90.05×━━×━━×n………………(1)25式中:X--酶活力單位,μ/g(mL);A--空白試驗消耗硫代硫酸鈉溶液的毫升數;B--樣品消耗硫代硫酸鈉溶液的毫升數;N--硫代硫酸鈉溶液的當量濃度;n--稀釋倍數;90.05--1mL1N硫代硫酸鈉相當葡萄糖毫克數;1/2--折算成1mL酶液的量;32.2--反應液總體積,毫升數;5--吸取反應液的毫升數。為計算方便,可按稀釋倍數參考表計算,系數乘以滴定空白和樣品所消耗0.05N硫代硫酸鈉溶液的差值(A-B)為酶活力單位。稀釋倍數參考表2。表2稀釋倍數參考表稀釋倍數系數稀釋倍數系數原數14.535507.522940580572.545625.5101455072515217.5100145020290200290025362.52503625304352.3水分2.3.1測定程序于已知恒重的40mm×25mm稱量皿中,稱取酶粉約2.0000g,在105～110℃恒溫干燥箱內烘2h,移至干燥器中冷卻,稱重,再在干燥箱內烘干,直至恒重。2.3.2計算W1-W2X1=━━━━×100………………………………………(2)W1-W式中:X1--樣品中水分的含量,%;W--稱量皿質量,g;W1--烘干前皿加樣品質量,g;W2--烘干后皿加樣品質量,g。2.4細度2.4.1測定程序稱取100g酶粉用40目標準分樣篩(銅網)篩分,稱其未通過的酶粉質量。2.4.2計算M-mX2=━━━━×100………………………………………(3)M式中:X2--酶粉樣品細度,%;M--原酶粉質量,g;m--篩后留存酶粉質量,g。2.5酶活力保存率E1X3=━━━━×100………………………………………(4)E式中:X3--酶活力保存率,%;E--原酶粉(液)活力;E1--檢測酶活力。2.6重金屬2.6.1試劑2.6.1.1硝酸:分析純。2.6.1.2硫酸:分析純。2.6.1.3鹽酸:分析純。2.6.1.3.16N鹽酸:量取500mL鹽酸,用蒸餾水稀釋至1000mL。2.6.1.3.21N鹽酸:量取83mL鹽酸,用蒸餾水稀釋至1000mL。2.6.1.4氨水:分析純。2.6.1.4.15N氨水:量取333mL氨水,用蒸餾水稀釋至1000mL。2.6.1.4.21N氨水:量取66mL氨水,用蒸餾水稀釋至1000mL。2.6.1.5pH3.5的乙酸鹽緩沖液:稱取25.0g乙酸銨溶于25mL蒸餾水中,加6N鹽酸45mL,用稀鹽酸或稀氨水調節pH至3.5,用蒸餾水稀釋至100mL。2.6.1.61%酚酞指示液:按GB603配制。2.6.1.7飽和硫化氫水:按GB603配制(此溶液于使用前制備)。2.6.1.8鉛標準溶液(每毫升含0.01mg鉛):按GB602配制,臨用前用蒸餾水稀釋10倍。2.6.2測定程序2.6.2.1樣品處理稱取5.0g樣品置于250mL凱氏燒瓶或三角燒瓶中,加10～15mL硝酸浸潤樣品放置片刻(或過夜)后,緩緩加熱,待作用緩和后稍冷,沿瓶壁加入5mL硫酸再緩緩加熱,至瓶中溶液開始變成棕色,不斷滴加硝酸(如有必要可滴加些高氯酸)至有機質分解完全,繼續加熱,至生成大量的二氧化硫白色煙霧。溶液應呈無色或微帶黃色。冷卻后將溶液移入50mL容量瓶中,用水洗滌三角燒瓶,將洗液并入容量瓶中,加蒸餾水至刻度,混勻,每10mL該溶液相當于1g樣品。取同樣重的硝酸、硫酸按上述方法作試劑空白試驗。2.6.2.2樣品測定2.6.2.2.1溶液A:吸取含鉛標準液1mL于50mL納氏比色管中,加水至25mL混勻,加1滴1%酚酞指示液;用稀鹽酸或稀氨水調節pH至中性(酚酞紅色褪去)。加入pH3.5的乙酸鹽緩沖液5mL,用蒸餾水稀釋至40mL,混勻備用。2.6.2.2.2溶液B:取一支與溶液A所配套的納氏比色管,加入20mL樣品液,加蒸餾水至25mL混勻,加1滴1%酚酞指示液,用稀鹽酸或稀氨水調節pH至中性(酚酞紅色褪去),加入pH3.5的乙酸鹽緩沖液5mL,用蒸餾水稀釋至40mL,混勻備用。2.6.2.2.3溶液C:取一支與溶液A、B所配套的納氏比色管,加入與溶液B相同量的樣品液,再加入與溶液A相同量的鉛標準液,加蒸餾水至25mL,混勻,加1滴1%酚酞指示液,用稀鹽酸或稀氨水調節pH至中性(酚酞紅色剛褪去),加入pH3.5的乙酸鹽緩沖液5mL,用蒸餾水稀釋至40mL,混勻備用。2.6.2.2.4向各管中加入10mL新鮮制備的硫化氫飽和液,混勻,放置10min后在白色背景下觀察,溶液B的色度不得深于溶液A的色度,溶液C的色度應與溶液A的色度相當或深于溶液A的色度。2.7鉛按GB5009.12《食品中鉛的測定方法》中的雙硫腙單色法執行。樣品處理采用硝酸-硫酸法。2.8砷按GB5009.11《食品中總砷的測定方法》中的銀鹽法執行。樣品處理采用硝酸-硫酸法。2.9黃曲霉毒素B1按GB5009.22《食品中黃曲霉毒素B1的測定方法》執行。2.10大腸菌群按GB4789.3《食品衛生微生物學檢驗大腸菌群測定》執行。2.11沙門氏菌按GB4789.3《食品衛生微生物學檢驗沙門氏菌檢驗》執行。3檢驗規則3.1產品需經生產廠技術部門檢驗,并簽發合格證方可出廠。生產廠以每一生產班次或每一罐進庫的量為同一批次的產品。3.2訂貨單位若需抽樣檢驗,應從該酶制劑中提取兩份,按本標準規定的試驗方法進行檢驗。若有一個樣品或一項指標不符合標準的要求,應與生產廠協商。再取一倍量的同批樣品共同進行復驗,如仍不合格時,則全批產品作為不合格品,退交生產廠處理。若產品經復驗合格,訂貨方應承擔試驗費用。如不合格,應由生產廠家承擔試驗費用。4標志、包裝、運輸、貯存4.1酶制劑的外包裝箱,除注明品名、生產廠名、規格、注冊商標外,還應注明食品添加劑。箱里并應附有產品檢驗合格證,合格證上印有品名、批號、數量、規格、生產日期、檢驗員等。4.2內包裝為食品用塑料袋,包裝分為2kg、3kg,應印有注冊商標、產品名稱、規格、重量、生產廠名。4.3本品含有生物活性物質,對光線、溫度、濕度易引起失活。在運輸途中應避免日光曝曬和雨淋。貯存倉庫應保持清潔、陰涼、干燥、通風。附加說明:本標準由中華人民共和國輕工業部、衛生部提出。本標準由輕工業部食品發酵工業科學研究所、衛生部食品衛生監督檢驗所歸口。本標準由無錫酶制劑廠、輕工業部食品發酵工業科學研究所、天津市衛生防病中心、無錫市衛生防疫站負責起草。